الأسبوع الثاني

سادسا : الإخصاب الخارجي :

تم تحفيز المبايض ثم جمعت في نفس يوم جمع الحيوانات المنوية وقمنا بعمل الإخصاب الخارجي في طبق بتري حيث وضعنا الحيوانات المنوية والبويضات وغطيناها بقطرات من زيت البرافين قبل أن نضع الطبق في الحضان وتركناه لمدة 24 ساعة.

 وقد حالفنا الحظ في رؤية بويضة مخصبة والجسم القطبي الثاني يظهر بوضوح.

سابعا : استخلاص الـDNA :

جمعنا الدم بواسطة أنابيب تجميع الدم الخاصة المحتوية على مادة مضادة للتجلط ووضعناها في جهاز الطرد المركزي لفصلها لمدة 15 دقيقة بسرعة 3000 دورة في الدقيقة.


فظهرت لنا ثلاث طبقات بعد عملية الفص : (بلازما – كريات الدم البيضاء + الصفائح الدموية – كريات الدم الحمراء)


قمنا بسحب البلازما ووضعه في أنابيب وعملنا على الطبقة الوسطى والسفلى فأضفنا محلول تكسير كريات الدم الحمراء ووضعناها على جهاز الهزاز لمدة 10 دقائق.


ثم وضعناها في جهاز الطرد المركزي لمدة 15 دقيقة بسرعة 3000دورة في الدقيقة وبعد الترسب تخلصنا من الرائق واحتفظنا بالراسب مع كمية قليلة من الرائق ثم رججناها بجهاز الفورتيكس لمدة 40 ثانية.


وقمنا بإضافة محلول تكسير محتويات الخلية قبل أن نرجها بواسطة الفورتكس ووضعناها في حمام مائي لمدة ساعة عند درجة حرارة 65 م.


ثم أضفنا محلول ترسيب البروتين وعملنا لها رج وتركناها في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق وبعدها وضعناها في جهاز الطرد المركزي فتكونت طبقتين احتفظنا بالرائق وتخلصنا من الراسب.


أخيرا أضفنا كحول الإيزوبوبانول وعملنا لها رج باليد فظهر لنا الـDNA على شكل شبكة خيوط.

ثامنا : تحضير محاليل مخففة من DNA وقياس التركيز والترحيل الكهربائي

تاسعا : تضخيم الجين (تفاعل البلمرة التسلسلي) :
نبذة عنهـ :-



هو طريقة لنسخ الحمض النووي ( DNA ) في المختبر ..


وهي تقنية حيوية لمضاعفة إنتاج الحمض النووي ( DNA ) لكي يتسنى إجراء اختبارات وأبحاث وفحوصات إضافية عليه ..~


الاكتشآف :-


تم اكتشافه عام 1983 م من قبل العالم د. كري مولس ..~


تفيد هذه التقنية في :-


• تشخيص الأمراض الوراثية ..


• الاستنساخ ..


• الطفرات ..


• تحديد الهوية الوراثية وإثبات الأبوة ..


معرفة تسلسل القواعد النيتروجينية ..






مميزاته :-


• يعطي نتائج سريعة ..


• يتم تحطيم جزء معين من الحمض النووي ..


• يستهلك كميات صغيرة ..


الجهاز يقوم بكافة المراحل وطباعة النتائج ..






متطلبات التقنية :-


1- عينة التفاعل ( DNA sample ) ..


2- البادئات ( Primers ) ..


3- أنزيم التفاعل ( Taq Polmerase ) ..


4- القواعد النيتروجينية ( dNTPs ) ..


5- محلول منظم (PCR buffer ) ..


6- ماء مقطر ..


جهاز تفاعل البلمرة التسلسلي ( Thermocycler ) ..






مبدأ تفاعل البلمرة التسلسلي :-


دورة متعاقبة لتفاعل يعتمد على ارتفاع درجة الحرارة وانخفاضها لنسخ جزء معين من الحمض النووي وتضخيم هذا الجزء عددياً ..~






مراحل التفاعل :-


1- مرحلة التفكيك


2- مرحلة الالتصاق


3- مرحلة الامتداد






طريقة العمل :-


قمنا باضافة المحاليل السابقة إلى الـ DNA بكميات معينة ووقت محدد ..
ثم وضعناها في أنابيب خاصة وأدخلناها في جهاز PCR الذي قما بنفسه بجميع الخطوات ومراحل التفاعل.

عاشرا: جهاز Reflotron:

تعرفنا على الجهاز وكيفية العمل علية وكيفية تقدير معدل الكلسترول والدهون الثلاثية في الدم وتعرفنا على المعدلات الطبيعية لها والتي يؤدي تخطيها إلى أمراض خطيرة كأمراض القلب التاجية.

 إعداد : مجموعة الاكسيتوسين